Овој пуфер се користи за одвојување на ДНК на електрофореза
TBE-баферот е особено корисен за одвојување на помали фрагменти на ДНК (MW <1000), како што се мали производи од рестрикционите ензимски дигести.
TBE има поголем капацитет за буфер и ќе даде поостра резолуција од TAE-баферот . TAE пуфер е раствор составен од Трис база, оцетна киселина и ЕДТА (Трис-ацетат-ЕДТА).
TBE е генерално поскапо од TAE и ја инхибира ДНК лигазата, што може да предизвика проблеми ако се наменети следните чекори за прочистување на ДНК и лигирање. Со трите едноставни чекори кои следат, научете како да направите TBE тампон. Не треба да трае повеќе од 30 минути за да се создаде овој тампон. Еве како:
Подгответе акции на EDTA
Растворот EDTA (етилендиамин тетраацетична киселина) треба да се подготви пред време. ЕДТА нема да излезе целосно во раствор додека рН не се прилагоди на околу 8.0. За раствор од 500-милилитри раствор од 0,5 M EDTA, измерете 93,05 грама EDATA динатриумова сол (FW = 372,2). Потоа растворете го во 400 милилитри деионизирана вода и прилагодете ја pH вредноста со NaOH. После тоа, дополнете го растворот до конечниот волумен од 500 милилитри.
Подготви акции решение за TBE
Направете концентриран (5x) основен раствор на TBE со тежина од 54 g трис база (FW = 121.14) и 27.5 g борна киселина (FW = 61.83) и растворање и во приближно 900 милилитри деионизирана вода. Потоа додадете 20 милилитри 0,5 M EDTA (pH 8,0) и прилагодете го растворот до конечен волумен од 1 литар.
Овој раствор може да се чува на собна температура, но во постарите раствори ќе се формира талог. Чувајте го тампон во стаклени шишиња и фрлете ги ако се формира талог.
Подгответе работно решение за TBE
За агарозен гел електрофореза, TBE-пуфер може да се користи во концентрација од 0,5x (1:10 разредување на концентрираниот фонд). Разредете го растворот со 10x во деионизирана вода. Конечните растворени концентрации се 45 mM Трис-борат и 1 mM EDTA. Пуферот сега е подготвен за употреба во водењето на агарозен гел .
Што ви треба
Да се направи тампон на TBE, ќе треба само четири супстанции. Останатите предмети на оваа листа се опрема. Четирите потребни супстанции се EDTA динатриумова сол, трис база, борна киселина и деионизирана вода.
Што се однесува до опремата, ќе ви бидат потребни pH мерач и стандарди за калибрација, како што е соодветно. Во прилог на тоа, ќе треба 600-милилитар и 1500-милилитарски чаши или колби. Заокружување на вашата опрема потреби се дипломира цилиндри и се промешува барови и мешање плочи.
Проверете го инвентарот во лабораторијата што ќе ја користите за да бидете сигурни дека имате се што ви треба пред да започнете. Ништо не е полошо отколку да морате да застанете во средината на подготовка на решение, бидејќи сте изумреле од соодветните материјали.
Ако вашата лабораторија е во училиште или на вашата работна локација, проверете со соодветен персонал за да видите дека ги имаат сите предмети во акциите. Со тоа можете да заштедите време и енергија на крајот.