Како да се направи овој имунохистохемиски боењето за боење
Фосфатниот бафериран солен раствор (PBS) е пуферски раствор кој најчесто се користи за имунохистохемиско (IHC) боење и често се користи во биолошките истражувања. PBS е раствор на сол на база на вода кој содржи натриум хидроген фосфат, натриум хлорид и, во некои случаи, калиум хлорид и калиум дихидроген фосфат.
Имунохистохемиско боење
Имунохистохемијата се однесува на процесот на откривање на антигени како што се протеините во клетките на ткивниот дел со користење на принципот на антитела кои се врзуваат специфично за антигените во биолошките ткива.
Имунофлуоресцентно боење беше првиот имунохистохемиски метод на боење.
Антигените стануваат видливи кога се конјугираат со антитела користејќи флуоресцентни бои, поради реакција на врзување со антиген-антитела Овој процес се јавува кога се активира со возбудлива светлина на одредена бранова должина под флуоресцентен микроскоп.
Осмоларноста и јонските концентрации на растворите се совпаѓаат со оние на човечкото тело - тие се изотонични.
Рецепт за ПБС
Можете да го подготвите PBS на неколку начини. Постојат повеќе формули. Некои од нив не содржат калиум, додека други содржат калциум или магнезиум .
Овој рецепт е релативно лесен. Тоа е за 10X PBS основен раствор (0.1M). Сепак, исто така можете да направите 1X акции решение, или започнете со овој 10X рецепт и разредете го на 1X.
Целиот процес трае околу 10 минути.
Исто така, се дава опција за додавање на Tween.
Што ќе треба да направите PBS Buffer
- Натриум фосфат монобазен (безводен)
- Натриум фосфат дибазен (безводен)
- Натриум хлорид
- Скали и мери бродови
- Магнетна мешалка и мешалка
- PH-сонда која е калибрирана и соодветни решенија за прилагодување на рН
- 1L волуметриска колба
- Tween 20 (опционално)
Како да направите солени фосфатирани бактерии (PBS)
Измерете 10.9г безводен натриум фосфат дибазен (Na2HPO4), 3.2g безводен натриум фосфат монобазен (NaH2PO4) и 90г натриум хлорид (NaCl).
Растворете во малку под 1 литри дестилирана вода.
Нагодете ја pH вредноста на 7,4 и измерете го растворот до крајниот волумен од 1L.
Разредете го 10X пред употреба и прилагодете ја pH вредноста ако е потребно.
Можете да направите раствор на PBS кој содржи 0,5 проценти Tween 20 со додавање на 5 ml Tween 20 во 1L растворот.
Совети за правење PBS Buffer
Чувајте го тампон на собна температура откако ќе го направите растворот за PBS.
Не-безводните реагенси може да се заменат, но ќе треба да ја пресметате соодветната маса на секоја за да ги прилагодите додадените молекули на вода.
Употреба на фосфатен бафериран салин (PBS)
Фосфатниот бафериран солен раствор има многу намени, бидејќи е изотоничен и нетоксичен за повеќето клетки. Може да се користи за разредување на супстанции и често се користи за плакнење на контејнери на клетки. PBS може да се користи како разреден во различни методи за да се исушат биомолекулите, бидејќи молекулите на водата во него ќе бидат структурирани околу супстанцијата-протеин, на пример. Тоа ќе биде "сушено" и имобилизирано на цврста површина.
PH останува стабилен и конзистентен за да се спречи уништувањето на клетките.
Тенкиот филм со вода кој се врзува за супстанцијата спречува денатурација или други конформациски промени. Карбонатните пуферки може да се користат за истата цел, но со помала ефикасност.
PBS, исто така, може да се користи за да се земе референтен спектар кога се мери адсорпцијата на протеините во елипсометријата.