Што вектори треба да направат со гените и клонирање
Во молекуларно клонирање, векторот е молекула на ДНК која служи како носител за трансфер или вметнување на странски ген (и) во друга ќелија, каде што може да се реплицира и / или да се изрази. Векторите се меѓу основните алатки за генско клонирање и се најкорисни ако кодираат и еден вид маркер-гени кои кодираат молекула на биоиндикатор која може да се мери во биолошка проценка за да се обезбеди нивно вметнување и изразување во организмот-домаќин.
Поточно, клонирачки вектор е ДНК земена од вирус, плазмид или клетки (од повисоки организми) кои треба да бидат вметнати со странски ДНК фрагмент за клонирање цели. Бидејќи клонирачкиот вектор може стабилно да се одржува во организмот, векторот исто така содржи карактеристики кои овозможуваат удобно внесување или отстранување на ДНК. Откако ќе биде клониран во клонирачки вектор, ДНК фрагментот може понатаму да биде под-клониран во друг вектор кој може да се користи со уште поспецифичност.
Во некои случаи, вирусите се користат за да се појават бактерии. Овие вируси се нарекуваат бактериофаги, или фаг, за кратко. Ретровирусите се одлични вектори за воведување на гени во животински клетки. Плазмидите, кои се кружни парчиња на ДНК, се најчесто користените вектори кои се користат за воведување на странска ДНК во бактериски клетки. Тие често носат гени за отпорност на антибиотици кои можат да се користат за тестирање на експресија на плазмидна ДНК, на антибиотички Петри плочи.
Пренос на ген во растителни клетки најчесто се изведува со користење на почвената бактерија Agrobacterium tumefaciens , која делува како вектор и внесува голем плазмид во клетката домаќин. Само оние клетки што го содржат клонирачкиот вектор ќе растат кога се присутни антибиотици.
Главните типови клонирање вектори
Шесте главни типови на вектори се:
- Плазмид. Циркуларна екстрахромосомна ДНК која автономно се реплицира во бактериската клетка. Плазмидите генерално имаат висок број на копирање, како што е pUC19 кој има број на копии од 500-700 копии по клетка.
- Фаг. Линеарни ДНК молекули добиени од бактериофаг ламбда. Може да се замени со странска ДНК без нарушување на неговиот животен циклус.
- Космиди. Друга циркуларна екстрахромозомна ДНК молекула која ги комбинира карактеристиките на плазмиди и фаги.
- Бактериски вештачки хромозоми. Врз основа на бактериски мини-F плазмиди.
- Крвни вештачки хромозоми. Ова е вештачки хромозом кој содржи теломери (за еднократна употреба тампони на краевите на хромозомите кои се отсечени за време на клеточната поделба) со потекло од репликација, центромер на квасец (дел од хромозомот кој ги поврзува сестринските хроматиди или диад) и изборниот маркер за идентификација во клетките на квасецот.
Човечки вештачки хромозом. Овој тип на вектор е потенцијално корисен за испорака на гените во човечките клетки, како и алатка за студии за експресија и за одредување на човечката хромозомска функција. Може да носи многу голем фрагмент на ДНК.
Сите вградени вектори имаат потекло од репликација, место за клонирање (кое се наоѓа каде вметнувањето на туѓа ДНК не ја нарушува репликацијата или инактивацијата на основните маркери) и изборниот маркер (обично ген кој обезбедува отпорност на антибиотик).