Мерење на кинетика на ензимите
Како малку позадина, ензимите се протеини кои делуваат како катализатори за намалување на количината на енергија за активирање за реакција. Енергијата на активација е енергијата што е потребна за да се започне реакција, бидејќи многу реакции не се случуваат многу брзо (или се случуваат воопшто), ако се термодинамички можни.
Ензимите катализираат специфични реакции на одредено место (познато како активно место) каде што реактантите се врзуваат и реагираат за да ги генерираат производите. Подстраниците имаат активни локации кои се специфични само за нив, така што ниедна друга супстанција не се врзува или не реагира на истата локација. Како заклучок и клуч, секој ензим ќе катализира само една специфична реакција (со некои исклучоци).
Специфичната активност се користи во методите на изолација на протеини за да се покаже процентот на прочистување. Важно е да се знае оваа единица при купување на ензими за да се покаже точно колку од чистиот ензим што го добивате.
Кога се мери ензимската кинетика (стапката на реакција на ензимот со супстрат - или површина), специфичната активност е дефинирана како количина супстрат ензимот конвертира (катализирани реакции), по mg протеин во ензимскиот препарат, по единица време.
Пример за специфична активност би бил:
- Специфичната активност на изолираниот ензим беше измерена на 150 уооли / мин / mg протеин пред прочистување и 800 уооли / мин / mg, по прочистување.
Специфичната активност е важна мерка за чистотата на ензимите. Различни серии од чист ензим треба да имаат исти вредности, па дури и разредување на ензимскиот раствор многупати ќе имаат идентични специфични вредности за активност, иако ќе има различни вредности на ензимска активност. Ова е затоа што при пресметувањето на специфичната активност, броителот (единици / ml) и именителот (mg / ml) се подеднакво засегнати.
Специфичната активност е многу различна од активноста, но пресметката на одредена активност сè уште зависи од вредноста на активноста. Ова значи дека наведената специфична активност ќе зависи и од дефиницијата на ензимската единица.
Пакетите на ензими кои имаат пониска од очекуваната специфична вредност на активност може да содржат ензимски молекули кои станаа изменети или се мешаат со нечистотии.
Фактори кои влијаат на ензимската активност
Можно е еден ензим да има различни вредности на измерени вредности кога се мери во различни лаборатории (односно, вистински разлики во измерената активност, а не очигледни разлики предизвикани од употребата на различни единечни дефиниции).
Начинот на кој се спроведува анализа (методот на тестирање за да се одреди чистотата на ензимите) ќе влијае на пријавените вредности на активност. На пример, ензимите обично се поактивни помеѓу температурите од 37 степени Целзиусови во споредба со 20 Целзиусови степени, па ако се изврши анализа на 21 Целзиусови степени, вредностите ќе се разликуваат од анализите спроведени на температура од 32 Целзиусови степени (обично , тестовите се изведуваат на температура помеѓу 20-37 степени Целзиусови).
Така, дефиницијата на ензимската единица би била подобро изразена како 1 единица (U) е количината на ензим кој катализира реакција на 1 nmol супстрат во минута под стандардни услови.