Развиен во 1983 година, процесот на ПЦР овозможил да се изврши секвенционирање на ДНК и да се идентификува редоследот на нуклеотидите во индивидуалните гени.
Методот користи термички циклус или повторното загревање и ладење на реакцијата за топење и репликација на ДНК. Како што ПЦР продолжува, "новата" ДНК се користи како образец за репликација и се јавува верижна реакција, експоненцијално засилување на ДНК дефиниција.
ПЦР техники се применуваат во многу области на биотехнологијата, вклучувајќи протеинско инженерство , клонирање, форензика (ДНК отпечатоци од прсти), тестирање на татковство, дијагноза на наследни и / или заразни болести и за анализа на примероци од животната средина.
Во форензика, особено, ПЦР е особено корисна бидејќи ја засилува дури и најмалата количина на ДНК-докази. ПЦР, исто така, може да се користи за да се анализира ДНК која е илјадници години, а овие техники се користат за да се идентификува сè од 800.000-годишниот мамут на мумии од целиот свет.
ПЦР постапката е како што следува:
- Иницијализација: Овој чекор е неопходен само за ДНК полимерази за кои е потребен ПЦР со топол почеток. Реакцијата се загрева помеѓу 94 и 96 ° C и се одржува 1-9 минути.
- Денатурација: Ако постапката не бара иницијализација, денатурацијата е првиот чекор. Реакцијата се загрева до 94-98 ° C за 20-30 секунди. Водородните врски на ДНК-образецот се нарушени и се создаваат молекули на едноклеточни ДНК-молекули.
- Режење: Температурата на реакцијата е пониска од 50 до 65 ° C и се одржува 20-40 секунди. Праймерите се приклештуваат на еднонамерен ДНК дефиниција. Температурата е исклучително важна за време на овој чекор. Ако е премногу жешко, буквар не може да се поврзе. Ако е премногу студено, буквар може да се поврзе несовршено. Добра врска се формира кога букварската секвенца тесно се совпаѓа со дефинитивната секвенца.
- Продолжување / издолжување: Температурата за време на овој чекор варира во зависност од типот на полимеразата. ДНК полимеразата синтетизира сосема нова ДНК жица.
- Конечно издолжување: Овој чекор се изведува на 70-74 ° C за 5-15 минути по крајниот циклус на ПЦР.
- Конечно одржување: Овој чекор е опционален. Температурата се одржува на 4-15 ° C и ја засилува реакцијата.
Постапката е поделена во три фази:
- Експоненцијална засилување: За време на секој циклус, производот (специфичното парче ДНК кое се реплицира) се удвојува.
- Фаза на нивелирање: Бидејќи ДНК полимеразата губи активност и троши реагенси, реакцијата се забавува.
- Плато: Не се акумулира повеќе производи.